Anti-DENV-NS1 monoclonal antibody for the differential histopathological diagnosis of hemorrhagic fever caused by dengue

Dengue is the most prevalent arboviral disease in humans in tropical and subtropical regions, especially in urban areas, and can cause major epidemics. Although a self-limiting illness, it may sometimes have serious hemorrhagic manifestations, and the outcome of dengue hemorrhagic fever has similar clinical manifestations as in other infections, which could result in death. Therefore, autopsy procedures are required under certain circumstances such as in hemorrhagic fevers, sometimes to confirm or to clarify the diagnosis that may have epidemiological consequences. Normally, the Immunohistochemistry Laboratory of the Pathology Center of Adolfo Lutz Institute receives autopsy samples from different hospitals in Sao Paulo State to confirm a previous diagnosis, especially hemorrhagic fever of infectious etiology. For this diagnosis, we have been using a mouse polyclonal antibody to dengue virus that often does not provide a clear conclusion, because of background staining or no relevant immunostaining, which hampers the histopathological analysis. Accordingly, in the present study, anti-DENV-NS1 monoclonal antibody (4H2) was tested to determine its accuracy in immunohistochemical analysis. Twenty-four autopsy cases of hemorrhagic febrile syndrome showing histopathological alterations compatible with dengue disease were studied: twenty cases were confirmed by RT-PCR for DENV-2 and in four by RT-PCR for yellow fever virus. Samples from autopsied cases of deaths caused by other infectious diseases (two meningitis C and two severe acute respiratory syndrome caused by influenza A H1N1) were included as negative control cases. Positive immunostaining for DENV-NS1 was detected in 16/20 (80%) liver samples and 11/15 (73%) spleen samples from autopsied hemorrhagic dengue patients, whereas the polyclonal antibody detected DENV antigens in 12/20 (60%) liver and in 6/15 (40%) spleen samples from the same cases. Positive results were not obtained with liver biopsy samples from yellow fever or Neisseria meningitides and Flu-A cases. 4H2 mAb recognizes the native protein of the four DENV serotypes in infected cells and did not cross-react with native ZIKV- or CHKV-infected cells by immunohistochemical assay, so it is a useful tool for differential histopathological conclusion of acute febrile hemorrhagic deaths.

An autopsy study of the spectrum of severe COVID-19 in children: From SARS to different phenotypes of MIS-C

Background: COVID-19 in children is usually mild or asymptomatic, but severe and fatal paediatric cases have been described. The pathology of COVID-19 in children is not known; the proposed pathogenesis for severe cases includes immune-mediated mechanisms or the direct effect of SARS-CoV-2 on tissues. We describe the autopsy findings in five cases of paediatric COVID-19 and provide mechanistic insight into the mechanisms involved in the pathogenesis of the disease. Methods: Children and adolescents who died with COVID-19 between March 18 and August 15, 2020 were autopsied with a minimally invasive method. Tissue samples from all vital organs were analysed by histology, electron microscopy (EM), reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry (IHC). Findings: Five patients were included, one male and four female, aged 7 months to 15 years. Two patients had severe diseases before SARS-CoV-2 infection: adrenal carcinoma and Edwards syndrome. Three patients were previously healthy and had multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) with distinct clinical presentations: myocarditis, colitis, and acute encephalopathy with status epilepticus. Autopsy findings varied amongst patients and included mild to severe COVID-19 pneumonia, pulmonary microthrombosis, cerebral oedema with reactive gliosis, myocarditis, intestinal inflammation, and haemophagocytosis. SARSCoV- 2 was detected in all patients in lungs, heart and kidneys by at least one method (RT-PCR, IHC or EM), and in endothelial cells from heart and brain in two patients with MIS-C (IHC). In addition, we show for the first time the presence of SARS-CoV-2 in the brain tissue of a child with MIS-C with acute encephalopathy, and in the intestinal tissue of a child with acute colitis. Interpretation: SARS-CoV-2 can infect several cell and tissue types in paediatric patients, and the target organ for the...(AU)

Reference genes for studies in infectious parasitic diseases in five types of human tissues

Gene expression analyses based on messenger RNA (mRNA) expression require accurate data normalization. When using endogenous reference genes, these should be carefully validated. Validated reference genes vary greatly depending on tissue, cell subsets and experimental context. This study was aimed to identify reference genes that have more stable mRNA levels among individuals in peripheral blood mononuclear cells (PBMC); fresh skin biopsies; lung and brain autopsies as well as, skin biopsies formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE). Therefore, 6 endogenous reference genes were evaluated by quantitative real-time polymerase chain reaction: 18S rRNA, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), TATA box-binding protein (TBP), beta-2-microbolin (B2M), ubiquitin C (UBC) and mitochondrially encoded ATP synthase 6 (MT-ATP6). Furthermore, validation of their stabilities and performance as reference genes was determined by geNorm and NormFinder programs. The results show that the most stable genes for PBMC and fresh skin biopsies were TBP and UBC; in FFPE lung autopsies and skin biopsies were GAPDH and B2M; and in FFPE brain autopsies were GAPDH and UBC. In addition, 18S rRNA was the least stable of all genes analyzed. These data concluded that even genes constitutively expressed have transcript level variations in different tissues as well as storage and experimental conditions. These observations suggest that suitable reference genes should be selected for normalization of gene expression data analysis.

As análises de expressão gênica baseadas na expressão do RNA mensageiro (mRNA) requerem normalização precisa dos dados. Ao usar genes de referência endógenos, estes devem ser cuidadosamente validados. Os genes de referência validados variam muito, dependendo do tecido, subconjuntos de células e contexto experimental. Este estudo teve como objetivo identificar genes de referência que apresentam níveis de mRNA mais estáveis ​​entre indivíduos em células mononucleares do sangue periférico (PBMC); biópsias de pele fresca; autópsias pulmonares e cerebrais, bem como biópsias de pele fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). Portanto, 6 genes de referência endógenos foram avaliados por reação quantitativa em cadeia da polimerase em tempo real: rRNA 18S, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), proteína de ligação à caixa TATA (TBP), beta-2-microbolina (B2M), ubiquitina C (UBC) e ATP sintase 6 mitocondrialmente codificada (MT-ATP6). Além disso, a validação de suas estabilidades e desempenho como genes de referência foi determinada pelos programas geNorm e NormFinder. Os resultados mostram que os genes mais estáveis ​​para PBMC e biópsias de pele fresca foram TBP e UBC; nas autópsias pulmonares de FFPE e biópsias de pele foram GAPDH e B2M; e nas autópsias cerebrais de FFPE foram GAPDH e UBC. Além disso, o 18S rRNA foi o menos estável de todos os genes analisados. Esses dados concluíram que mesmo os genes expressos constitutivamente apresentam variações no nível de transcrição em diferentes tecidos, bem como condições experimentais e de armazenamento. Essas observações sugerem que genes de referência adequados devem ser selecionados para normalização da análise dos dados de expressão gênica.

Genotyping of toxoplasma gondii: DNA extraction from formalin-fixed paraffin-embedded autopsy tissues from AIDS patients who died by severe disseminated toxoplasmosis

This study investigated the genetic features of T. gondii isolated directly in autopsies of HIV-infected patients who died with severe disseminated toxoplasmosis. This retrospective analysis was conducted in a cohort of 15 HIV-infected patients with clinical and laboratory data. They had previous cerebral toxoplasmosis at least 6 months before the disseminated toxoplasmosis episode. The hypothesis was that they were infected with highly virulent parasites due to the condition in which they died. T. gondii genotyping was done directly in DNA extracted from 30 autopsy brain and lung samples (2 per patient) and mutilocus PCR-RFLP genotyping was done using 12 molecular markers. The 30 clinical samples were genotyped successfully in 8 or more loci and six suggestive genotypes were identified. One of them was Toxo DB #11, previously identified in different domestic animals and virulent in experimental animals. The other five suggestive genotypes...(AU)

Identification of Leishmania spp. promastigotes in the intestines, ovaries, and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus actively infesting dogs

Sand flies are recognized as the major vector of canine visceral leishmaniasis. However, in some areas of Brazil where sand flies do not occur, this disease is found in humans and dogs. There has been speculation that ticks might play a role in transmission of canine visceral leishmaniasis and the DNA of Leishmania spp. has been reported in whole ticks. We investigated the presence of Leishmania spp. promastigotes in the intestines, ovaries, and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks collected from tick-infested dogs in two cities of Brazil. We used 66 dogs that tested positive and 33 that tested negative for Leishmania spp. according to direct cytological examination assays. Ten ticks were collected from each dog and dissected to collect the intestines, ovaries, and salivary glands for immunohistochemistry (IHC) and diagnostic real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). IHC results showed Leishmania spp. in 98, 14, and 8 % of the intestines, ovaries, and salivary glands, respectively. Real-time PCR showed that 89, 41, and 33 % of the tick intestine, ovary, and salivary glands, respectively, were positive for Leishmania spp. The verification of promastigotes of Leishmania spp. by two independent techniques in ticks collected from these urban region dogs showed that there is need for clarification of the role of ticks in the transmission of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Avaliação de anticorpos monoclonais como marcadores diferenciais de meningites bacterianas e virais por meio de técnica imuno-histoquímica / Investigation on the monoclonal antibodies as differential markers for viral and bacterial meningitis by means of immnunohistochemistry technique

Desde 1996, o Laboratório de Anticorpos Monoclonais, Antígenos e Adjuvantes - Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (CI-IAL) tem desenvolvido trabalhos na caracterização antigênica de cepas de Neisseria meningitidis utilizando-se painel de anticorpos monoclonais(AcMo) pré-estabelecido, e produção de novos monoclonais para a análise de cepas com perfis desconhecidos. AcMo foram obtidos das diferentes fusões realizadas no laboratórioutilizando-se células esplênicas e linfonodos poplíteos. Dois hibridomas murinos secretores de AcMo anti-N. meningitidis produzidos e caracterizados no CI-IAL têm sido avaliados por meio de estudo imuno-histoquímico (IHQ) no Centro de Patologia-Laboratório de Imunohistoquímica-IAL. Com a padronização da reação, estabeleceu-se um protocolo para efetuar apesquisa de antígenos de N. meningitidis por IHQ. Houve melhoria no diagnóstico histopatológicoda meningite meningocócica, sobretudo em situações em que não há confirmação da presença do microorganismo por técnicas biomoleculares, como PCR, utilizando-se AcMo específicos para antígenos de diferentes sorogrupos, sorotipos e subtipos de N. meningitidis. O resultado obtido nos primeiros testes mostrou-se promissor, e os dois AcMo demonstraram excelentesresultados. Não houve reatividade cruzada com meningite viral, S. pneumoniae, Rickettsia ou rubéola. Nos próximos estudos, é fundamental ampliar número de amostras, incluindo-se aquelas coletadas de pacientes com meningites meningocócicas e de indivíduos infectados com outros agentes patogênicos.

Since 1996, the Laboratory of Monoclonal Antibodies, Antigens and Adjuvants - Immunology Center of the Adolfo Lutz Institute (CI-IAL) has been developing works on the antigenic characterization of strains of Neisseria meningitidis using pre-established panel of monoclonal antibodies (AcMo) And production of new monoclonals for the analysis of strains with unknown profiles. AcMo were obtained from the different fusions performed in the laboratory using splenic and popliteal lymph nodes. Two murine hybridomas secreting anti-N mAb. Meningitidis produced and characterized in CI-IAL have been evaluated by means of an immunohistochemical study (IHC) at the Center for Pathology-Laboratory of Immunohistochemistry-IAL. With the standardization of the reaction, a protocol was established to carry out research of antigens of N. meningitidis by IHC. There was improvement in the histopathological diagnosis of meningococcal meningitis, especially in situations where there is no confirmation of the presence of the microorganism by biomolecular techniques, such as PCR, using specific mAbs specific for antigens of different serogroups, serotypes and subtypes of N. meningitidis. The results obtained in the first tests proved to be promising, and the two MAbs demonstrated excellent results. There was no cross reactivity with viral meningitis, S. pneumoniae, Rickettsia or rubella. In the next studies, it is essential to expand the number of samples, including those collected from patients with meningococcal meningitis and from individuals infected with other pathogens.

Investigation on the monoclonal antibodies as differential markers for viral and bacterial meningitis by means of immnunohistochemistry technique / Avaliação de anticorpos monoclonais como marcadores diferenciais de meningites bacterianas e virais por meio de técnica imuno-histoquímica

Since 1996, the Laboratory of Monoclonal Antibodies Antigens and Adjuvants - Immunology Center of Adolfo Lutz Institute (IC-IAL) has been working on N. meningitidis strains antigens characterization by using a predetermined monoclonal antibodies (MoAb) panel; and the new monoclonal production has been performed for characterizing strains with unknown profiles. MoAb were obtained from different fusions performed at IAL using spleen cells and popliteal lymph nodes. Two murine hybridomas secreting MoAb anti-N. meningitidis antigens, produced and characterized in the Laboratory of IC-IAL, are presently being evaluated by immunohistochemical (IHC) technique at Immunohistochemistry Laboratory - Pathology Center, IAL. After standardizing these reactions, a protocol for performing investigation on N.meningitidis antigens by using IHQ was established. An increment in the histopathological diagnosis of meningococcal meningitis was occurred, by using MoAb specific for antigens from N. meningitidis serogroups, serotypes and subtypes, mainly in those cases without microorganisms confirmation by biomolecular techniques as PCR. The results obtained in these first tests proved to be promising, and two MoAb showed excellent results. No cross-reactivity with viral meningitis, S. pneumoniae, Rickettsia or Rubella was detected. For the further studies, it is fundamental to increase the samples size, including samples from patients with meningococcal meningitis and from individuals infected with other pathogens.

Desde 1996, o Laboratório de Anticorpos Monoclonais, Antígenos e Adjuvantes - Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (CI-IAL) tem desenvolvido trabalhos na caracterização antigênica de cepas de Neisseria meningitidis utilizando-se painel de anticorpos monoclonais (AcMo) pré-estabelecido, e produção de novos monoclonais para a análise de cepas com perfis desconhecidos. AcMo foram obtidos das diferentes fusões realizadas no laboratório utilizando-se células esplênicas e linfonodos poplíteos. Dois hibridomas murinos secretores de AcMo anti-N. meningitidis produzidos e caracterizados no CI-IAL têm sido avaliados por meio de estudo imuno-histoquímico (IHQ) no Centro de Patologia-Laboratório de Imunohistoquímica-IAL. Com a padronização da reação, estabeleceu-se um protocolo para efetuar a pesquisa de antígenos de N. meningitidis por IHQ. Houve melhoria no diagnóstico histopatológico da meningite meningocócica, sobretudo em situações em que não há confirmação da presença do microorganismo por técnicas biomoleculares, como PCR, utilizando-se AcMo específicos para antígenos de diferentes sorogrupos, sorotipos e subtipos de N. meningitidis. O resultado obtido nos primeiros testes mostrou-se promissor, e os dois AcMo demonstraram excelentes resultados. Não houve reatividade cruzada com meningite viral, S. pneumoniae, Rickettsia ou rubéola. Nos próximos estudos, é fundamental ampliar número de amostras, incluindo-se aquelas coletadas de pacientes com meningites meningocócicas e de indivíduos infectados com outros agentes patogênicos.

Principais processos neoplásicos encontrados em psitacídeos mantidos em cativeiro / Main neoplasic processes in psittacines birds kept in captivity

Um estudo anatomopatológico envolvendo 130 psitacídeos oriundos de centros de triagens, zoológicos e criadouros, visando a determinação da causa de morte destes animais, revelou a presença de neoplasias em sete animais, totalizando 5,4 por cento dos casos. Os processos neoplasicos foram caracterizados como colangiocarcinoma, colangioma, linfoma, hemangiossarcoma e carcinoma renal primário, sendo o colangiocarcinoma o mais freqüentemente encontrado, presente em três animais. Este trabalho descreve estas neoplasias, levando em consideração os aspectos macro e microscópicos, meios de diagnósticos e espécies acometidas.

An anatomopathologic study of 130 captivy psittacines from zoos, breeders and rehabilitation centers showed the presence of neoplastic disease in seven birds, totalizing 5.4 percent of the cases. The neoplasms were identified like cholangiocarcinoma, cholangioma, lymphoma, haemangiosarcoma and renal cell carcinoma. The cholangiocarcinoma was the tumor most commonly observed. it was present in birds. This study describes the macro and microscopic findings of these tumors; also reports diagnostic methods employed to identify these neoplasms.

Análise de indicadores internos e externos relevantes à resolutividade diagnóstica em laboratório de referência em imuno-histoquímica / Analysis of internal and external factors potentially relevant to the diagnosis in immunohistochemistry in a public reference laboratory

OBJETIVO: Avaliar a resolutividade da imuno-histoquímica (IHQ) no diagnóstico de neoplasias em um laboratório de referência da rede de saúde pública e determinar potenciais influências da comunicação entre a fonte requisitante e o laboratório executante sobre tal resolutividade. MATERIAL E MÉTODOS: Mil casos oncológicos oriundos de oito hospitais públicos foram submetidos a exame IHQ, sendo 500 imediatamente anteriores e 500 posteriores à intervenção para aprimoramento da comunicação entre os requisitantes e o laboratório de IHQ. A recuperação de antígenos foi realizada pelo calor úmido sob pressão, e o sistema de detecção foi o LSAB plus System. Os resultados foram expressos como positivo, negativo ou inconclusivo. Foram coletadas informações sobre recebimento do bloco de parafina e fixador utilizado, guia de requisição de serviços de diagnóstico e terapia (SADT), laudo anatomopatológico original, topografia, idade e sexo do paciente. RESULTADOS E CONCLUSÃO: Foram coradas 5.719 lâminas pela IHQ de 989 casos considerados. A IHQ mostrou-se resolutiva em 919/989 (92,9 por cento) casos. O número de antígenos por caso variou de um a 22, com média de 5,8 marcadores. A pesquisa de até cinco antígenos resolveu 534 casos e foram necessários até 10 marcadores para esclarecer 919 casos. Ainda hoje, informações básicas, como laudo anatomopatológico, idade e sexo do paciente, topografia, hipótese diagnóstica precisamente exposta, fixador e blocos de parafina em boas condições nem sempre são disponibilizadas aos laboratórios de referência. O aprimoramento dessa comunicação é essencial para a racionalização do fluxo dos exames IHQ e o incremento na qualidade da conclusão diagnóstica.

OBJECTIVES: The aim of this study was to evaluate the resolutivity of immunohistochemical (IHC) assays on neoplastic samples in a public health laboratory and to assess the influence of communication between the requiring institution and reference one on the quality of the IHC diagnosis. MATERIAL AND METHODS: One thousand oncological samples from eight public hospitals were submitted to IHC assay: 500 immediately before and 500 after an intervention demanding further information from the requiring pathologist. Antigen retrieval was performed in a pressure cooker and the detection system was LSAB plus System. The results were expressed as positive, negative or inconclusive. Information about paraffin blocks, fixatives, official requiring form, the attachment of original anatomopathological report, topography of the lesion, age and gender of the patients was collected. RESULTS AND CONCLUSION: From 989 samples, 5,719 slides were stained by IHC, leading to a resolutivity for 919/989 (92.9 percent). The number of antigen tested ranged from one to 22 - average of 5.8 for case. Panels with up to five antigens per case resolved 534 samples, whereas up to 10 markers were necessary to resolve 919 samples. Even nowadays, basic information, such as anatomopathological reports, age, gender, representative and technically superior paraffin block are not always available to the reference laboratory. The improvement of such communication is essential to rationalize the flux of immunohistochemical tests and to enhance the quality of diagnostic conclusions.

Experimental chronic granulomatous inflammatory process in fish: a morphological, ultrastructural anel immunocytochemical study

The purpose of the present srudy was to evaluate the chronic granulomatous inflammatory process experimentally induced in Oreochromis niloticus by the inoculation ofBCG and to clarify aspects of the inflammatory reaction in fish for a better understanding of the phylogeny of the process. Results obtained by light microscopy and ultrastructural analysis showed the participation of macrophages, thrombocytes, lymphocytes, eosinophils, plasma cells and foreign type giant cells in the inflammatory process. Besides these cell types, a granulomatous reaction mainly consisting of epithelioid cells was also observed ultrastrucrurally. These epithelioid cells developed desmosomes throughout the experiment, and also began to express receptors for cytokeratin. Both findings are immunocytochemicaliy characteristic of epithelial cells. Pigment cells (melanomacrophages) could also be seen surrounding ali the granulomatoid formation in a crescent fashion and participating in the chronic granulomatous inflammatory reaction.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o processo inflamatório crônico granulomatoso induzido experimentalmente em Oreochromis niloticus através da inoculação de BCG e elucidar aspectos da reação inflamatória em peixes para uma melhor compreensão da filogenia do processo. Os resultados obtidos por microscopia de luz comum e ultra-estrutural demonstraram a participação de macrófagos, trombócitos, linfócitos, eosinófilos, células plasmáticas e células gigante tipo corpo estranho no processo inflamatório. Além desses tipos celulares, uma reação granulomatosa constituída predominantemente de células epitelióides também foram observadas ultraestruturalmente. Essas células epitelióides desenvolveram desmossomos ao longo do experimento, e também passaram a expressar receptores para citoqueratina, características estas de células epiteliais. Células pigmentares (melanomacrófagos), envolvendo de maneira crescente toda a formação granulomatóide e, participando ativamente da reação inflamatória crônica granulomatosa.

Controle de qualidade interlaboratorial em imuno-histoquímica: citoceratinas e receptor de estrógeno como modelos / Interlaboratorial quality-control in immunohistochemistry: cytokeratins and estrogen receptors as models

INTRODUÇAO: O grande incremento do uso da imuno-histoquímica (IHQ) em numerosos laboratórios de anatomia patológica amplia o poder de resolução diagnóstica, mas traz certo grau de heterogeneidade de procedimentos e resultados. Seguindo recentes propostas da literatura internacional, participantes do Clube de IHQ da Sociedade Brasileira de Patologia desenvolvem ações de controle de qualidade, aplicando protocolos de sua rotina à pesquisa de antígenos que sirvam como indicadores de qualidade da reação. MATERIAL E MÉTODO: Um total de dez laboratórios participou das duas etapas deste estudo, cujos marcadores foram pancitoceratinas e receptores de estrógeno. Com lâminas controle recebidas dos laboratórios, cada participante efetuou a técnica de IHQ conforme sua prática diária, retornando as lâminas juntamente com o formulário de procedimento. A avaliação semiquantificada de 0 a 4 da intensidade da reação específica e de 0 a 3 da coloração de fundo e da qualidade da técnica histológica foram atribuídas individual e sigilosamente durante a projeção em data show em reunião do Clube de IHQ, gerando um escore final. RESULTADOS E DISCUSSAO: As variações na imunocoloração de citoceratinas e receptor de estrógeno não comprometeram sua detecção nas lâminas preparadas nos diversos laboratórios. Tais variações associaram-se à diversidade de sistemas de recuperação antigênica e de amplificação, resultando ora em imunopositividade menos intensa, ora em maior fundo. Outros estudos devem abordar questões de interpretação, incluindo-se critérios para semiquantificação.

Imunoexpressäo da proteína Her-2 em punçäo aspirativa com agulha fina de carcinoma de mama: correlaçäo com os achados da peça cirúrgica / Immunoexpression of Her-2 protein in fine-needle aspirates of breast carcinoma: correlation with surgical specimens

Objetivo: avaliar a imunoexpressäo da proteína HER-2 em punçäo biópsia aspirativa de carcinoma de ductos infiltrantes da mama e nos espécimes cirúrgicos correspondentes. Correlacionar a imunoexpressäo da proteína HER-2 com o grau histológico. Método: foram examinados 48 esfregaços fixados em álcool, previamente corados pela técnica de Papanicolaou, e cortes histológicos de blocos de parafina do tecido correspondente. Todos foram submetidos à técnica de imuno-histoquímica, utilizando o método da avidina-biotina-peroxidase com um anticorpo policlonal (A0485-Dako). As reações foram realizadas simultaneamente com recuperaçäo antigênica. A avaliaçäo dos resultados foi feita por método semiquantitativo, segundo a graduaçäo do HercepTest. Foram considerados positivos apenas os casos graduados em 3+. Resultados: observou-se positividade de 39,6 por cento nos esfregaços e 35,4 por cento nos cortes histológicos respectivos, sendo a concordância cito-histológica nos casos positivos quase perfeita (kappa 0,82). A utilizaçäo do método de avaliaçäo dos cortes histológicos mostrou-se reprodutível nos esfregaços e padronizou a interpretaçäo dos resultados. A correlaçäo entre a positividade para proteína HER-2 e o grau histológico näo foi significante, mas houve tendência a imunoexpressäo mais freqüente em tumores menos diferenciados. Conclusäo: a positividade das reações imunocitoquímicas nos esfregaços foi comparável à obtida nos cortes histológicos, podendo portanto o material de punçäo aspirativa por agulha fina, previamente corado pela técnica de Papanicolaou, ser utilizado na avaliaçäo da imunoexpressäo da proteína HER-2

Clinicopathologic evaluation of thyroid tumors through p53 protein accumulation and proliferative activity measured using Ki-67 and PCNA monoclonal antibodies

Thyroid neoplasms frequently present difficulties in the diagnostic and prognostic evaluation due to the poor relation between morphology and tumor behavior. It is particularly important to define parameters to evaluate the potential of aggressiveness of such neoplasias with ancillary techniques in order to improve the clinical management of the patients with thyroid tumors. The potential of three markers - p53, Ki-67 and PCNA - in adenocarcinomas of the thyroid was evaluated and the relation of these markers to the prognostic behavior of the tumors were analyzed in a retrospective study. Seventy-seven cases of patients with neoplasms of the thyroid, submitted to thyroid surgery by the same surgeon (RSC), belonging to the team, were studied. Histological sections of the samples were submitted to immunohistochemical reactions with anti-p53 (cione D07), anti-Ki-67 (clone MIB1) and anti-PCNA (clone PC 10) monoclonal antibodies. The positive demarcations were counted in 200 cells of selected areas. The results were correlated with clinical and histopathologic parameters, selected among the survival distributions for each category of a same variable, through the Cox-Mantel test. There were 14 p53 positive cases, 17 Ki-67 positive and ali cases were PCNA positive. Although Ki-67 is theoretically present in ali the phases of cell division, it was not possible to identify it in ali cases; PCNA, was shown as an identification marker with expressive sensitivity. The immunohistochemical study showed ali follicular adenocarcinomas with PCNA positive immunoreaction, 11 (36,6 percent) Ki-67 positive and 8 (26,6 percent) p53 positive; 30 papillary tumors were PCNA positive, 5 (16,6 percent) Ki-67 positive, and 6 (20 percent) p53 positive. Medullary and Hürthle cell adenocarcinomas showed only PCNA positive immunoreaction, 3 and 2 cases respectively. Regarding the undifferentiated adenocarcinomas, 5 specimens presented PCNA positive immunoreaction, 1 was Ki-67 positive, 3 were p53 positive. PCNA monoclonal antibody showed a positive correlation with patient age and histologic type (p=0.005 and p= 0.032 respectively).

Cutaneous papillomas of green turtles: a morphological, ultra-structural and immunohistochemical study in Brazilian specimens

Eleven juvenile green turtles (Chelonia mydas) from Atlantic Ocean, Brazil, with multiple cutaneous papillomatosis were examined. Histologically, the papillomas exhibit stromal hyperplasia proliferation and epithelial proliferation. The epithelial cells had nuclear changes suggestive of viral infection and severe nuclear pleomorphism. A large nuclear halo was present in the cases of epithelial proliferation; in these cells, nuclear features were frequently dyscariotic, without inclusion. All fibropapillomas examined were negative for papillomavirus group-specific antigens (BPV) and herpesvirus group-specific antigens (HSV1 / HSV2) by the peroxidase-antiperoxidase technique. Electronic microscopy investigation was negative for papillomaviruses and herpes-viruses particles

Expressão imuno-histoquímica dos marcadores pcna, KI67 e p53 em carcinomas epidermóides do trato aerodigestivo superior / Immunohistochemical expression of markers pcna, Ki67 and p53 in squamous cell carcinomas of upper aerodigestive tract

Objetivo: Os carcinomas epidermóides do trato aerodigestivo superior são tumores de comportamento biológico heterogêneo. O objetivo deste trabalho é verificar se a expressão imuno-histoquímica dos marcadores Ki67, PCNA e P53 apresenta correlações com parâmetros prognósticos clínico-patológicos. Métodos: Determinação da expressão imuno-histoquímica dos antígenos Ki67, PCNA e P53 em espécimes tumorais fixados e embebidos em parafina de 53 pacientes com carcinoma epidermóide em diferentes sítios primários do trato aerodigestivo superior. Resultados: Os marcadores tiveram altos índices de expressão imuno-histoquímica, sendo 46,5% para o Ki67, 66,5% para o PCNA e 36,5% para o P53. Não houve correlação da expressão do Ki67 e do PCNA com o estadiamento TNM (AJCC), nem com o grau de malignidade. Aexpressão do Ki67 apresentou correlação positiva com a expressão do PCNA (p = 0,037). O mesmo aconteceupara o PCNA e o número de mitoses por campo (p = 0,001). Conclusões: De acordo com estes resultados, concluiu-se que a determinação da imunorreatividade dos marcadores Ki67 e PCNA é um método objetivo e quantificável para avaliar proliferação celular que pode subsidiar as informações prognósticas.

Background: Squamous cell carcinomas of upper aerodigestive tract are tumors with heterogeneous biological behaviour. The aim of present study is to assess whether any correlation exists between immunohistochemical expression of Ki67, PCNA and P53 markers and clinicopathologic parameters. Methods: Immunohistochemical determination of Ki67, PCNA and P53 antigens in fixated and paraffinembedded tumour especimens from 53 patients with squamous cell carcinoma in different primary locations of upper aerodigestive tract. Results: The markers had high evidence average rates with 46,5% forKi67, 66,5% for PCNA and 36,5% for P53. There was neither correlation of Ki67 and PCNA evidence nor with TNM staging nor with malignancy degree. The expression of Ki67 demonstrated correlation with the expression of PCNA (p = 0,037). The same ocurred to PCNA and the number of mitoses (p = 0,001). Conclusions: According to these results, it has been concluded that the determination of immunoreactivityof Ki67 and PCNA proliferation markers is an accurate and quantitative method which may provide prognostic information.

Papilomavírus humano em esfregaços citológicos de mulheres acima de 50 anos: estudo morfológico "in situ" nas respectivas biópsias / Human papillomavirus in cytologic smears women older than 50: morphologic study \"in situ\" hybridization in selective biopsies

A infeccçäo por papilomavírus humano tem sido estudada preferencialmente em mulheres sexualmente reprodutivas, sendo que o diagnóstico citopatológico de HPV tem demonstrado alta especificidade quando comparado com a técnica do PCR. Poucos relatos, entretanto, têm avaliado a ocorrência de HPV em pacientes de faixa etária elevada. Por isso, no presente estudo, avaliamos a frequência de sinais sugestivos de infecçäo por HPV em citologia de pacientes acima de 50 anos a fim de determinarmos a frequência dessas lesöes nessa faixa atária, além de correlacionarmos esses achados à pesquisa de DNA viral através da hibridizaçäo "in situ" das respectivas biópsias. Estudamos também a influência do estado de maturaçäo do epitélio na cauidade do diagnóstico citológico do HPV. De 121 casos citológicos consecutivos com alteraçöes citopáticas de infecçäo por HPV encontrados em esfregaços de mulheres acima de 50 anos, 22 (18,24 por cento) tiveram biópsia de colo uterino encaminhadas ao nosso laboratório para hibridizaçäo "in situ" através do uso de sonda para detecçäo de papilomavírus com Omni-probe. Desses casos, seis foram positivos. Em novos cortes, realizou-se hibridizaçäo para HPV 31, 33, 35; HPV 16, 18 e HPV 6,11, tendo-se demonstrado positividade para HPV 31, 33, 35 em dois casos, um dos quais também positivo para HPV 16, 18. Quatro casos näo mostraram imunorreaçöes positivas para os tipos de HPV testados. Concluímos que os padröes citológicos encontrados nas mulheres acima de 50 anos säo similares aos de outras faixas etárias, e que a reaçäo de hibridizaçäo em estudo retrospectivo poderá fornecer alguns elementos para tipagem desses HPV nessa faixa etária. Quanto à maturidade do epitélio concluímos que a acuidade diagnóstica do HPV em citologia é menor nos esfregaços atrófico. A frequência do HPV nesta faixa foi 5,5 por cento

A importancia da fixacao em imuno-histoquimica: a distribuicao de vimentina e citoqueratinas em amostras fixadas em alcool e formol / The importance of fixation in immunohistochemistry: vimentin and cytokeratin distribution in ethanol and formaldehyde sample

O efeito da fixacao em alcool absoluto ou formol e da digestao proteolitica por tripsina na pesquisa imuno-histoquimica dos filamentos intermediarios citoqueratinas e vimentina foi estudado em cortes continguos de um caso de carcinossarcoma (cistadenofibrocarcinoma) de ovario. Reatividades superiores foram obtidas, para ambos os marcadores, quando da fixacao em alcool, mesmo em amostras estocadas ate 60 dias. A pesquisa de citoqueratinas em material fixado em formol foi beneficiada pela digestao proteolitica. Inversamente, tal procedimento mostrou-se deleterio na coloracao para vimentina. A apresentacao destes dados visa alertar os cirurgioes e oncologistas para a importancia da fixacao na preservacao de epitopos em casos de neoplasias cujo estudo possa requerer analises imuno-histoquimicas.